戴安高效液相色谱仪操作流程

戴安高效液相色谱仪（HPLC）的操作流程需严格遵循仪器设计规范，以确保分析结果的准确性和仪器稳定性。以下是典型的操作步骤，涵盖开机前准备、系统平衡、方法设置、样品分析、关机维护等关键环节。

一、开机前准备
1.环境检查
确保实验室温度（15-30℃）和湿度（<80%）符合仪器要求，避免温度波动影响色谱柱性能。
检查电源电压（通常为220V±10%），接地良好，避免电气干扰。
2.流动相准备
根据分析方法选择流动相（如甲醇、乙腈、水或缓冲盐溶液），需满足以下要求：
纯度：HPLC级溶剂（避免杂质干扰检测）。
过滤：使用0.22 μm或0.45 μm微孔滤膜过滤，去除颗粒物（防止堵塞色谱柱和系统）。
脱气：通过超声（15-30分钟）或在线脱气机去除溶解气体（避免气泡导致基线噪声或泵压力波动）。
若使用缓冲盐流动相（如磷酸盐、醋酸盐），需确保充分溶解且pH符合方法要求（缓冲盐易析出堵塞系统，需特别注意）。
3.色谱柱检查
确认色谱柱型号（如C18、C8等）、规格（内径、长度、粒径）与方法匹配。
检查色谱柱是否保存在合适的溶剂中（通常为甲醇或乙腈），避免干涸导致填料塌陷。
4.样品准备
样品需过滤（0.22 μm或0.45 μm滤膜）或离心（10,000 rpm，5分钟）去除颗粒物。
若样品溶剂与流动相极性差异大（如样品用DMSO溶解，流动相为水/甲醇），需稀释或过渡溶剂处理，避免溶剂效应（如峰展宽、分裂）。

二、开机与系统初始化
1.启动仪器
按顺序开启电源：
先打开泵（Pump）、自动进样器（Autosampler）、柱温箱（Column Compartment）的电源开关。
再打开检测器（Detector，如紫外-可见检测器UV/VIS）电源。
z后开启工作站软件（如Chromeleon色谱数据系统）。
2.系统排气（Prime）
在工作站软件中选择“Prime”功能，对泵和进样器进行排气：
泵排气：排除管路中的气泡（尤其流动相更换后必须操作）。
进样器排气：确保进样针和流路无气泡（避免进样体积不准）。
排气时观察废液管出口，确认无连续气泡排出后停止。
3.系统平衡
设置初始流动相比例（如甲醇:水=50:50），流速（如1.0 mL/min），柱温（如25℃）。
运行泵使流动相冲洗系统10-30分钟（若流动相含缓冲盐，需更长时间平衡），直至基线平稳（噪声<±0.002 AU，漂移<±0.005 AU/h）。

三、方法设置与验证
1.创建/调用分析方法
在工作站软件中新建方法或调用已验证的方法文件，需设置以下参数：
泵参数：流动相组成（比例）、流速（通常0.5-2.0 mL/min）、梯度程序（等度或梯度洗脱）。
进样器参数：进样体积（如10-20 μL）、进样模式（手动或自动）、洗针程序（避免交叉污染）。
检测器参数：波长（如254 nm）、带宽（如8 nm）、响应时间（如0.1-1.0秒）。
柱温箱参数：温度（如25℃或方法指定值）。
2.方法验证（首次使用或更换条件时）
基线检查：运行空白流动相，确认基线平稳无异常噪声。
系统适用性测试：注入标准品或对照溶液，检查理论塔板数（N≥2000）、分离度（R≥1.5）、拖尾因子（T≤2.0）是否符合方法要求。

四、样品分析
1.自动进样（推荐）
将样品瓶放入自动进样器样品盘，设置样品信息（名称、位置、进样次数）。
在软件中选择“Run Sequence”运行序列，仪器按预设顺序自动进样、分析。
2.手动进样（备用）
若需手动操作，将样品注入进样针，通过软件触发进样（注意避免引入气泡）。
3.数据采集
分析过程中实时监控色谱图，确认峰形正常（无拖尾、分裂）、基线稳定。
若出现异常（如峰展宽、基线漂移），需暂停分析并排查原因（如色谱柱污染、流动相气泡）。

五、关机与维护
1.分析完成后冲洗系统
反相色谱柱：用高比例有机相（如甲醇或乙腈，90-100%）冲洗色谱柱30-60分钟（去除缓冲盐和强保留物质，防止填料损伤）。
正相色谱柱：用初始流动相（如正己烷/异丙醇）冲洗。
缓冲盐流动相：必须用纯水→有机相过渡冲洗，避免盐析出堵塞色谱柱和泵。
2.关机顺序
停止泵运行，关闭检测器光源（延长灯寿命）。
依次关闭检测器、进样器、泵电源，z后关闭工作站软件和总电源。
3.色谱柱保存
反相色谱柱：保存在纯甲醇或乙腈中（避免填料干涸）。
正相色谱柱：保存在正己烷或指定溶剂中。
长期不用时，需用堵头密封色谱柱两端。
4.日常维护
定期更换在线过滤器（每1-3个月）、密封垫（每6-12个月）。
若流动相含缓冲盐，每次使用后需彻底冲洗系统（避免盐沉积）。

六、注意事项
1.流动相安全
有机溶剂（如甲醇、乙腈）易燃易挥发，需在通风橱中操作；废液需分类收集（有机相与水相分开）。
缓冲盐溶液避免接触皮肤（可能腐蚀）。
2.色谱柱保护
避免压力超过色谱柱z大耐受值（通常<4000 psi），防止填料塌陷。
禁止用纯水冲洗C18等反相色谱柱（导致疏水填料溶胀损坏）。
3.数据管理
分析完成后及时备份数据（工作站自动保存或导出为PDF/Excel格式）。
记录实验条件（流动相、温度、进样体积等），确保可追溯性。

通过以上流程，可规范操作戴安高效液相色谱仪，确保分析结果的可靠性和仪器长期稳定运行。若遇复杂问题（如基线异常、峰形异常），需结合仪器日志和色谱图进一步排查（如检测器污染、色谱柱失效等）。

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