骨切片的应用场景

　　骨切片是一种很有活力的组织，在人的一生中都在不断地重建。现已证实，在骨中存在一些特殊物质，能够影响到破骨细胞的活性。每批骨切片通过重吸收检测法来测试其质量。在该检测中，由骨切片上产生凹点证明破骨能力。随后用培养基酶免吸附试剂盒Crosslaps检测上清液。只有当两项测试都呈阳性时，该骨切片才能用于进一步的重吸收检测。破骨细胞产生凹点的活性通过人破骨重吸收方法检测。对破骨重吸收的定量分析可以采用传统的对凹点染色方法，亦可使用培养基酶免吸附检测法Crosslaps，两者关系见图1与2。由于破骨细胞实验往往需要较大量的蛋白质，而从牛骨切片中提取的蛋白质用于96孔板，IDS公司开发了能够适用于6，12，24，48孔板的骨皮质切片。如图3所示。将人破骨细胞分散覆盖于牛骨皮质片上，然后加入不同浓度的抗重吸收剂（A:90μM,B:30μM,C:10μM,D:0μM）。第6天取等量细胞培养上清液用于检测胶原c端交联肽（ctx）的量（培养基ELISA-CrossLaps）,从骨片上转移破骨细胞并且用阻凝蛋白苏木精染色，形成可见的凹点（图1）。用这种6孔板大骨片（GBS）来提取破骨细胞蛋白，这些破骨细胞在骨上而非塑料上培养，对蛋白质的表达是有影响的（数据未列出）。要进行破骨细胞的基因描述实验时，我们推荐使用这些底物提取RNA。从骨切片分离RNA的方案和人破骨细胞的培养方案可根据要求制定.
【来源】骨切片由牛股骨的皮质部分制成，适合96孔板，直径6mm，大概200μm厚。【储存】骨切片保存于4°C下70%乙醇中。为了保持骨切片的质量，应缩短使用周期和避免室温下放置。【处理】推荐在转移至96孔板之前，先将骨切片置于含培养基的10%血清中清洗三次。【培养】重吸收实验一般持续72小时（见图2）。然而在加入试剂到破骨细胞培养液中16或24小时后，就可观察到细微的变化了，甚至8小时后即可用相应方法观察到。【特征】与凹点染色和划线不同，培养基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨细胞培养的终止。因此，可以从相同的股切片中获得几个样品，从而使互换性检测特定物质影响下的破骨细胞活性成为可能。材料的处置与常见细胞培养物的处置相同。
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